【組織培養試劑】

一般提示：優化您的細胞生長條件。只使用新鮮配制的培養基和添加劑，并經可能減少所用試劑的變更。

基礎培養基—目前所使用的各種市售培養基（如，RPMI 1640和DMEM）。培養基的成分包括營養物質（氨基酸，葡萄糖），維生素，無機鹽，和緩沖物質。有些成分非常不穩定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產生問題。務必要使培養基避光保存。因為已知有一些組分和緩沖物質，如HEPES，當暴露于光照下就會分解產生細胞毒性物質。

酚紅試劑可保護細胞免受一些HEPES降解所產生的毒性效應，但在使用未加酚紅試劑的培養基的應用場合下，如熒光素酶的測定，細胞毒性則仍然是一個問題。

胎牛血清—血清是一種含有白蛋白、球蛋白、生長促進因子和生長抑制因子的極為復雜的混和物。采集血清所用動物的年齡、營養水平、和健康狀況可影響到血清中這些成分的數量和質量。因此血清易受顯著生物學變異的影響。

添加劑—某些細胞的生長依賴于一些對生命力或細胞分裂*的物質（如，生長因子，微量元素，必需代謝物和蛋白等）。

CO₂培養箱—細胞生長所需環境為37℃、相對濕度為95％的CO₂培養箱。用CO₂是為了控制pH值。細胞生理對pH的變化非常敏感，因此多數細胞培養基都含有碳酸氫鹽緩沖體系。有些培養基需要CO₂ 濃度為5％來有效控制pH值，而另一些則需要10％的CO₂。需要向您的培養基供應者核對一下適當的CO₂濃度。如果培養箱內培養條件與所需條件不一致（溫度、濕度和CO₂）則會導致實驗結果的板間變異性。來自于培養箱內的污染物、化學物質，或真菌／細胞的污染也都可能影響到細胞生理

【細胞】

一般提示：密切觀察您的細胞；確保它們狀態良好。在開始轉染細胞之前，先制定一個適當的種板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持*狀態。

增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素，它可以是影響結果的一致性和質量的zui重要的變量。為幫助解決這些問題，羅氏應用科學部與ATCC®（美國菌種保藏中心）進行了合作。
為保證將被轉染細胞的質量，羅氏應用科學部建議使用新近從ATCC®獲得的細胞系。

分裂細胞相比較非分裂細胞—分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數轉染操作而言，細胞都在轉染當天或前一天種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于生長過度的狀態。由于FuGENE® 6和HD轉染試劑對于細胞作用溫和，可同時進行貼壁細胞的種板和轉染。
此外，還常用促有絲分裂刺激物（如，病毒轉化，生長因子，條件培養基，以及滋養細胞）來活化原代培養細胞。

貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異顯著。天生趨于懸浮的細胞（如HL 60，Jurkat）非常難以轉染。相反，天生為貼壁的細胞（如HEK，CHO）則可適應懸浮生長的條件。

這兩種細胞（即那些天然懸浮的和那些適應懸浮的細胞）的漿膜是不一樣的。據推測轉染過程中的一個限制步驟就是通過內吞作用攝取轉染分子（DNA或RNA與轉染試劑的復合物）；然而，目前對此尚未有分子水平上的合理機制的解釋。細胞間膜結構的差異可能是某些細胞類型天生難以轉染的部分原因。所以，尋找更有效轉染試劑的工作目前還主要是經驗性的，尤其對于那些天生為懸浮的細胞而言更是如此。

這常常是在不含血清而含有抑制轉染的特殊添加劑的培養基中發生。經小心處理后，這些細胞可適應于在沒有添加劑的環境中懸浮生長。如果這些適應于懸浮生長的貼壁細胞在沒有這些添加劑的環境中生長，那么它們就可以被轉染。

分批方案—在對培養細胞進行分批傳代培養之前，必須把貼壁細胞用胰蛋白酶消化使之脫離培養基質。這個常規操作可導致正常細胞功能受到嚴重損害。因此分批方案的不同（如，胰蛋白酶消化時間的延長，胰蛋白酶的失活，以及消化后直到轉染開始的時間）都可能對轉染實驗有所影響。
如果在轉染時細胞過于密集，那么種到培養板上的就會是細胞團塊而非單個細胞。
對于某些細胞／試劑組合而言，漿膜狀態被改變后有可能會影響到所用試劑和DNA的*配用量和配比。

傳代次數—傳代次數是指對一個細胞系進行分批傳代的頻度（通常在一個實驗室范圍內）。在某些情況下，自建立細胞系起的確切傳代次數無法得知。

某些細胞系相比較其他細胞系而言較不穩定，可能會隨著培養時間的延長而改變，視不同的細胞系和培養條件而定。培養條件的不同可引起克隆選擇。因此名稱相同的同一細胞系有關其生理學和形態學（以及轉染能力）性質可能會有很大的差異。