質粒小量提取試劑盒*！

50T/100T 常溫保存，復檢期一年。

產品說明：

本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的 DNA 的原理特異性提取質粒 DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能、專一地吸附 DNA，可 大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。使用本試劑盒提取的質粒 DNA 可適用于各種常規 操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入 RNaseA（將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8℃保存。如非指明，所有離心 步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。 

操作步驟：

1、取 1-5ml 細菌培養物，12000rpm 離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多次離心將菌 體沉淀收集到一個離心管中）。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 250ul 溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入 RNaseA），使用移液器或旋 渦振蕩器*懸浮細菌細胞沉淀。注意：如果菌塊未*混勻，會影響裂解導致質粒提取量和純度 偏低。

3、向離心管中加入 250ul 溶液Ⅱ，溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和， 以免污染細菌基因組 DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破 壞。

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4、向離心管中加入 350ul 溶液Ⅲ，立即溫和地上下翻轉 6-8 次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉 淀。12000rpm 離心 10 min，用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中，盡量不要吸出 沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再 Solarbio 第 2 頁 共 2 頁 次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min， 倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm 離心 1min，棄 廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數分鐘，目的是將吸附柱中殘余 的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR 等。

9、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液， 室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min。

10、為了增加質粒的回收效率，可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中，室溫放置 2min，12000rpm 離心 1min。

注意事項：

1、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘， 待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。

2、洗脫緩沖液體積不應少于 50ul，體積過小影響回收效率;洗脫液的 pH 值對洗脫效率也有影晌， 若需要用水做洗脫液應保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調至此范圍)，pH 值低于 7. 0 會降低洗脫效率，DNA 產物應保存在-20℃，以防 DNA 降解。

3、 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于 10kb 的大質粒，應加大菌體使用量，使用 5-10ml 過夜培養 物，同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增 加提取效率。

4、DNA 濃度及純度檢測：得到的質粒 DNA 純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有 關。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA 應在 OD260 處有 顯著吸收峰，OD260 值為 1 相當于大約 50ug/ml 雙鏈 DNA、 40ug/ml 單鏈 DNA  OD260/OD280比值 應為 1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為 pH 值和離子存 在會影響吸光值，但并不表示純度低。

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