大鼠IV型膠原（ColIV）ELISA檢測試劑盒實驗操作指南！

產品名稱：大鼠IV型膠原（ColIV）ELISA檢測試劑盒

產品規格：96T

儲存條件：2-8℃，避光防潮保存

有效期：6個月

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠IV型膠原（ColIV）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并澈底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠IV型膠原（ColIV）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗步驟（僅供參考）

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶玩全溶解后再使用。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻。

6.本產品僅供科研實驗用，不做其它用途！