細胞凍存液的使用說明！

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。

原理：

細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

使用方法：

1、細胞凍存

（1）常規收集貼壁細胞或懸浮細胞至15ml無菌離心管；

（2）100-200g，離心5-10分鐘，棄上清；

（3）計算出細胞總數和所需細胞凍存液的量。細胞的凍存密度一般為5×105~1×107cells/ml；

（4）加入適量細胞凍存液，用移液槍輕輕吹打以重懸細胞，分裝于1.5ml或2ml細胞凍存管中，并做好標識；

（5）將細胞凍存管放置于可逐步降低溫度的裝置如程序性凍存盒內并放置在-80oC冰箱內，確保冷卻速度約為1oC/min。通常冷卻速度不宜快于0.5oC/min；

（6）短期保存可放置在-80oC冰箱內，若保存應轉移至液氮中保存。

2、細胞復蘇

（1）從液氮中取出凍存管，迅速置于37oC水浴鍋內，輕輕晃動(1分鐘內)，直至*融化；

（2）將細胞懸液轉移至15ml無菌離心管中，加入約5-10ml預熱的*培養基，輕輕混勻；對于一些復蘇效率很高的細胞也可直接將細胞懸液轉移至離心管進行下一步驟的離心；

（3）100-200g，離心5-10分鐘；

（4）確保細胞沉積于管底后，小心棄掉上清；

（5）加入適量預熱的*培養基，輕輕吹勻后轉移至培養器皿中，放入細胞培養箱中培養。

注意事項：

1、本產品需注意無菌操作，避免溶液被微生物污染；

2、請確保凍存前細胞生長情況良好，例如處于對數生的細胞，并且凍存時存活率大于90%；

3、建議細胞凍存在液氮中，可以長時間進行保存。如果置于-80oC保存，保存時間大約為1年；

4、凍存和復蘇用新配制的培養液。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作