考馬斯亮藍(lán)G250染色液的配制方法

簡(jiǎn)介

產(chǎn)品描述：屬于三苯甲烷類染料，有G250和R250兩種，可與蛋白質(zhì)形成較強(qiáng)的非共價(jià)復(fù)合體，白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見(jiàn)的藍(lán)色。考馬斯亮藍(lán)G250是Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分，考馬斯亮藍(lán)R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色。

性狀：藍(lán)色至深紫色粉末

CAS： 6104-58-1

分子式：C47H48N3O7S2Na；分子量：854kD

溶解性：溶于熱水（50mg/ml），乙醇（40mg/ml）

純度：≥90%

Bradford法測(cè)蛋白濃度試驗(yàn)過(guò)程

1) 染液的配制：

將100mg的G-250溶解于50mL 95％的乙醇中，加入85％(w/V)的磷酸l00mL，加水定容至1L。

2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

在7個(gè)試管中分別加入含0、10、20、30、40、50、60ug標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，用水補(bǔ)足到60ul，加3mL染色液，混勻后室溫放置15分鐘，至595nm處比色測(cè)定。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，A595的值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3) 測(cè)定：

取未知濃度的樣品60ul，同上測(cè)定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量。

該方法反應(yīng)快、操作簡(jiǎn)便、消耗樣品少，但不同蛋白質(zhì)間的差異大，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，顯色受時(shí)間和溫度影響較大。考馬斯亮藍(lán)染色能力強(qiáng)，特別要注意比色杯的清洗。較高濃度的去污劑(Triton X-100，SDS等)、尿素和硫酸銨對(duì)測(cè)定有干擾。

染色方法：

1）考馬斯亮藍(lán)G250染色液的配制

將0.2g G250溶于100ml水中（需要加熱至50°C促進(jìn)溶解）。冷卻后，加入100ml 2N H2S04。室溫放置3h-過(guò)夜，然后濾紙除雜。過(guò)濾后的溶液，小心加入22.2ml 10N KOH，然后加入28.7g TCA。混勻后室溫放置> 3h，再過(guò)濾除雜從而獲得琥珀般的棕色溶液，不含藍(lán)色沉淀。

2）染色只需將膠*浸在此染色液中，約15 min后條帶就會(huì)顯示出來(lái)。幾小時(shí)后染色條帶的亮度和靈敏度會(huì)進(jìn)一步加強(qiáng)。

3）染色液室溫約穩(wěn)定存放2-3周。

保存：室溫保存

備注：本公司所有產(chǎn)品科研使用