組織自發熒光淬滅劑-操作指南

描述：許多組織會產生可透過各種波長濾光片的內源性自發熒光，顯著干擾抗體標記熒光觀察甚至導致免疫組化染色失敗。自發熒光淬滅試劑中的離子可通過碰撞方式捕獲自發熒光光源分子發出的電子，阻止該電子從激發態回歸基態和能量釋放，從而淬滅自發熒光。采用優化的孵育時間，可以最大限度地消除自發熒光而不明顯影響抗體標記的熒光。


 

適用：各種組織、細胞免疫熒光染色的自發熒光消除。特別適用于神經組織自發熒光淬滅。

儲存：4 oC避光。

使用方法：

以下步驟在免疫熒光組化染色完畢之后(而非在熒光染色完畢之前)執行。對特定的組織和細胞類型，必需優化孵育時間以便最大限度淬滅自發熒光而不明顯影響抗體標記的熒光(步驟2)。請仔細閱讀后面的說明。

1. 吸去PBS或相應洗滌緩沖液，用蒸餾水短暫沖洗組織切片或細胞培養板中的細胞。

2. 加入適量但充足的自發熒光淬滅劑覆蓋組織切片或瓶皿中的細胞。室溫孵育10-90min。

3. 吸去自發熒光淬滅劑，用蒸餾水短暫沖洗。

4. 吸去蒸餾水，用PBS覆蓋組織切片或位于細胞培養板中的細胞。

5. 封片。建議使用抗熒光衰減封片劑。該封片劑可防止抗體標記熒光衰退。

6. 熒光顯微鏡觀察。

說明：

1.   不同物種不同類型組織的自發熒光具有不同的特征，使用組織自發熒光淬滅劑的效果可能會有差別。另外，任何針對自發熒光的淬滅，將會在一定程度上降低抗體熒光強度。所幸的是該試劑對自發熒光的淬滅程度遠遠超出抗體熒光強度的降低，因而能在二者之間獲得較好的平衡。由于不很清楚的原因，本試劑對于消除腦脊髓神經組織的自發熒光具有更好的效果。

2.   為獲得最佳效果，必需優化孵育時間以便最大限度淬滅某一特定組織的自發熒光而不明顯影響抗體標記的熒光(步驟2)。重要的標本應在確定最佳孵育時間之后使用本試劑。進行優化時，可取數張組織切片或位于培養皿中的細胞，在免疫熒光組化染色完畢之后加入組織自發熒光淬滅劑，孵育5、10、30、60、90分鐘等不同時間，沖洗后觀察熒光。如果組織自發熒光仍然很強，可延長孵育時間；如果孵育時間小于10分鐘而熒光消退十分明顯，可將孵育時間減少為1-5分鐘，或者取少量的組織自發熒光淬滅劑加等份的雙蒸水稀釋，然后孵育10-90分鐘進行優化。

3.   組織自發熒光淬滅劑必須在完成免疫熒光組化染色后使用，否則將嚴重降低抗體熒光。