0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色液一種陰離子型偶氮染料

0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液是一種陰離子型偶氮染料，其核心功能是通過(guò)染料排斥試驗(yàn)區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞。

作用機(jī)制：活細(xì)胞的細(xì)胞膜完整，具有選擇透過(guò)性，能排斥臺(tái)盼藍(lán)分子；而死細(xì)胞或膜受損細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，臺(tái)盼藍(lán)可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，與蛋白質(zhì)結(jié)合使細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色。

濃度標(biāo)準(zhǔn)：0.4%為常規(guī)濃度，適用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的活力檢測(cè)，過(guò)高濃度可能導(dǎo)致背景染色干擾，過(guò)低則影響死細(xì)胞著色效果。

注意事項(xiàng)

時(shí)間控制：染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（>10分鐘）可能導(dǎo)致活細(xì)胞膜通透性改變，誤染為死細(xì)胞。

背景干擾：臺(tái)盼藍(lán)可結(jié)合血清蛋白，導(dǎo)致高背景染色。建議離心后用非蛋白培養(yǎng)基或PBS重懸細(xì)胞。

熒光淬滅：臺(tái)盼藍(lán)可能淬滅細(xì)胞表面或內(nèi)部的熒光信號(hào)，需與熒光染色實(shí)驗(yàn)錯(cuò)開(kāi)進(jìn)行。

個(gè)人防護(hù)：臺(tái)盼藍(lán)具有潛在致癌性，操作時(shí)需穿實(shí)驗(yàn)服、戴手套和口罩。

染色步驟（僅供參考）

懸浮細(xì)胞：

離心收集細(xì)胞，PBS洗滌2次。

取10μL細(xì)胞懸液與10μL臺(tái)盼藍(lán)溶液混合，吹打均勻。

吸取少量混合液，注入血球計(jì)數(shù)板蓋片邊緣，使液體充滿計(jì)數(shù)室。

倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)：活細(xì)胞無(wú)色，死細(xì)胞藍(lán)色。

貼壁細(xì)胞：

棄培養(yǎng)基，PBS洗滌后加入胰蛋白酶消化。

離心收集細(xì)胞，PBS洗滌后重懸于臺(tái)盼藍(lán)工作液，室溫孵育5分鐘。

離心棄上清，PBS洗滌后重懸，顯微鏡計(jì)數(shù)。