大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1（PCK1）elisa試劑盒

簡(jiǎn)要描述：南京信帆生物供應(yīng)大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1（PCK1）elisa試劑盒,提供技術(shù)指導(dǎo)和售后服務(wù),質(zhì)量穩(wěn)定，提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。信帆生物銷售的試劑盒均采用進(jìn)口材料生物試劑，具有操作簡(jiǎn)單，靈敏度高等特點(diǎn)，咨詢.所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于食用，醫(yī)療等其它用途。

產(chǎn)品型號(hào)：

所屬分類：大鼠elisa試劑盒

更新時(shí)間：2016-12-29

廠商性質(zhì)：其他

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詳情介紹

產(chǎn)品名稱：	大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)elisa試劑盒
英文名稱：	Rat PCK1 (Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1) elisa Kit
規(guī)格：	48T/96T
產(chǎn)品保質(zhì)期：	6個(gè)月
保存條件：	2-8度
該試劑盒操作原理：
本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系
我們?cè)谧鯡LISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，通常選取血液樣本為我們的代測(cè)樣本，具體收集方法如下：
血液樣本的收集：全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)elisa試劑盒
我們?cè)谶x擇抗凝劑的時(shí)候，有幾點(diǎn)需要注意的：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要，同時(shí)所取的全血的量也要盡量; ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固; ③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）; ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
組織樣本也是我們經(jīng)常使用到的，動(dòng)物組織樣本的前處理，勻漿方法如下：
動(dòng)物組織樣本的前處理: 1、取組織塊（0.1g～0.2g）在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱重，放入勻漿管中。 2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)（使用0.86%的生理鹽水）于勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。 3、勻漿的方式有多種：手工勻漿，機(jī)器勻漿，超聲粉碎。 ①、手工勻漿：將玻璃勻漿管置于冰水浴條件下，手動(dòng)勻漿，30秒/次，間隔30秒，重復(fù)6～8次，制成10%的勻漿液。 ②、機(jī)器勻漿：用機(jī)械式勻漿機(jī)（組織搗碎機(jī)或內(nèi)切式勻漿機(jī)），8000～10000轉(zhuǎn)/分，冰水浴條件下，10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3～5次。（皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間） ③、超聲粉碎：用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3～5次。鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎，若沒有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間。 4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右,離心10～15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定.（測(cè)定相應(yīng)指標(biāo)的同時(shí)需測(cè)一下相應(yīng)樣本的蛋白濃度，總蛋白測(cè)試盒本所有售）
大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)elisa試劑盒
我們銷售的試劑盒的具體操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，具體步驟如下（試劑盒已經(jīng)包含了所有試劑，自備儀器為酶標(biāo)儀，洗板機(jī)，溫育箱，移液器）：
1. 加樣：標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)10個(gè)孔，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔設(shè)定1個(gè)孔加入50微升蒸餾水（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔，在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
6. 溫育：操作同3。
7. 洗滌：操作同5。
8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
10. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)elisa試劑盒
我們銷售的試劑盒性能穩(wěn)定：
試劑盒性能我們是通過幾個(gè)數(shù)值反應(yīng)的：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批間分別小于9%和11%
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